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超微量分光光度计进行核酸定量的应用分析

发表时间:2022-08-10  |  点击率:280
  核酸的定量是超微量分光光度计使用频率较高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链DNA、双链DNA,以及RNA。核酸的高吸收峰的吸收波长260nm。
  
  由于每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应消光因子。如:1OD的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。
  
  测试后的吸光值经过上述系数的换算,从而得出相应的样品浓度。除了核酸浓度,分光光度计显示几个非常重要的比值表示样品的纯度,如A260/A280的比值,用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是280nm。
  
  纯净的样品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。
  
  A230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。
  
  超微量分光光度计可以像普通的紫外-可见分光光度计一样行使功能。如BIO-DLMicroDrop可以显示从185到910nm的光波下样品的吸光值。可以同时指定检测40个波长下的吸光值并把数据显示在报告中。
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