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如何利用超微量分光光度计判断RNA质量?

发表时间:2022-09-20  |  点击率:47
  在RNA的提取过程中,外源物质的引入、操作不规范、内外源性核酸酶的影响,都会导致RNA的降解,影响提取质量。利用核酸电泳可以判断RNA的完整性,通过分光光度计可以验证RNA的浓度和纯度。
  
  在超微量分光光度计上,加入1-2微升的RNA提取样本就可以进行光吸收的检测。从结果中我们可以得到RNA的光谱图、浓度、a260/280的比值、a260/230的比值。
  
  不同物质有不同的吸收波长:
  
  A260nm是核酸吸收峰的吸收波长;A230nm是碳水化合物和盐等的吸收波长;A280nm是蛋白和酚类物质吸收峰的吸收波长。
  
  由于样品差异,我们提取的RNA浓度不一,需要根据目的基因表达水平及预实验来确定最合适的RNA浓度。
  
  除了浓度之外,我们还会得到A260/280和A260/230两个比值,这两个参数是核酸纯度的指示值。
  
  纯净的RNA样品A260比A280接近2.0。如果比值低于1.8,表示存在蛋白或酚类物质的影响;如果比值大于2.2,表明RNA已经发生了降解。所以比值范围在1.8-2.2这个范围内,结果都是合格的。
  
  纯净的RNA样本的A260和A230的比值大于2.0,若比值小于2.0,则表明样品被碳水化合物(糖类)、盐类或有机溶剂污染,需要纯化样品。
  
  所以,评判RNA的质量,一定要用超微量分光光度计对RNA浓度和纯度的进行验证哦。只有这些参数都在可用范围之内,提取到的RNA才是可用的。
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