超微量分光光度计测蛋白有问题？大概率原因找到了

　　超微量分光光度计主要用于核酸及蛋白质的浓度测定和纯度评估。然而，在实际应用中，经常会出现核酸较容易被准确测量，而蛋白质样品的浓度测量偏差较大的情况。很多用户也困惑于此，同样是基于紫外吸收的检测，为何两种样品的检测性能会有差异呢？

　　

　　一、温度和挥发

　　

　　通常来说，液体的温度升高，由于分子间引力减弱，表面张力会随之降低。这也解释了为何低温保存的核酸样品，张力较大，更易形成液柱。在夏天实验环境较热，或者制药用户的恒温恒湿实验室，温度是相对较高的，张力会随之下降。

　　

　　二、盐

　　

　　无机盐作为一种非表面活性剂，具有水合作用，趋向于把水分子拖入水中,因此会增大表面张力，反之亦然。因此，脱盐或低盐的样品，表面张力会降低，常见于超微量分光光度计纯化的流程。例如在进行蛋白质结构分析或质谱分析时，样品需经过脱盐处理，这样的样品在进行浓度测量时，并不容易形成液柱。

　　

　　三、表面活性剂

　　

　　蛋白提取过程中经常使用的表面活性剂（清洁剂），如SDS、TritonX100，以及在发酵过程中加入的消泡剂等成份，会大幅降低样品的表面张力，这些物质常会残留在样本中，难以*去除。因此，在工艺过程中测量蛋白样品，是一项挑战。

　　

　　四、固液接触表面

　　

　　当使用移液器将微量样品加载到点样台后，会出现液体与固体的接触表面，点样台表面的亲水/疏水性质会影响液体的表面张力。

　　

　　因此，使用拉伸法的主流品牌微量分光光度计，点样台表面具有疏水性涂层，会增大液体的张力。但是，随着使用损耗，涂层会逐渐消耗，需要定期使用专用试剂进行维护和再生。

　　

　　在正确的维护之后，这一影响因素也随之消失，但也增加了超微量分光光度计的维护成本，而绝大多数用户并不知道这一点。