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详细说明梯度PCR的梯度温度控制

发表时间:2022-05-17  |  点击率:159
  梯度温度控制是帮助用户进行梯度PCR优化实验的特性之一,以便确定PCR实验方案的温度和保持时间,尽量减少实验次数。在理论上,梯度应在均匀的金属加热模块上显示线性温度斜率。
  
  然而,传统PCR仪通常只采用单一的热模块并通过位于两端的两个加热及冷却元件进行温度的控制。该设计经常会导致以下限制:
  
  1、仅能设置两个温度:在热模块的两端设置引物退火的高、低极限温度。因此,无法在模块间实现其他区域温度的精准设置。
  

梯度PCR

 

  2、由于不同列之间的热学相互作用,模块上不同区域之间的温度更可能遵循的是S形的曲线变化而非正的线性梯度。
  
  因为加热模块的设计,仅能设置两个温度:在热模块的两端设置成引物退火的高、低极限温度。两个温度点的设置是基于计算出来的退火温度(Tm)和不同列之间期望实现的温度差异。
  
  VeriFlex技术,可实现更好的引物退火温度控制。该技术的一种形式便是设计带有三个或更多分割金属模块的梯度PCR仪,每一模块都具有独立的加热和冷却元件。相比于梯度模块,该模块设计可带来:
  
  1、独立设置3或6个不同温度的能力,以便使得每个独立的区域都能进行更好的温度控制,特别是在梯度优化过程中。
  
  2、独立金属模块的绝热性阻止了模块之间的热交换。这就可实现更为精准的模块温度控制,确保模块之间实现线性的温度变化。
  
  因此,选择能够精准进行梯度温度控制的梯度PCR仪将大大节省优化所需时间,找到退火温度和时间,并确保在梯度模式下优化的条件在正常模式下也能获得相同的结果。
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